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<NBS7684> CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒

欄目:NoninBio
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CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒
貨號:NBS7684-500T;
NBS7684-1000T
品牌:NoninBio

 

CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

 

產品編號

產品名稱

包裝規格

價格

NBS7684-500T

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

500T

623

NBS7684-1000T

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

1000T

960

 

產品簡介:

CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒(CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit)是一款基于熒光探針CFDA, SE,用于細胞增殖檢測和細胞熒光示蹤的檢測試劑盒。此方法目前廣泛替代MTT法或者3H-胸腺嘧啶核苷摻入法(3H-thymidine incorporation)等細胞增殖檢測方法。本試劑盒包含粉末形式的CFDA, SE探針,細胞培養級的溶劑,以及細胞標記液,使用方便,操作簡單。按照每個樣本的標記體積為1ml來算,我司提供兩種規格的試劑盒,分別可檢測500個和1000個樣品。

CFDA, SE,英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl esterCAS NO. 150347-59-4,是一種穩定的、細胞膜滲透性的非熒光染料,由兩個醋酸基團和一個琥珀酰亞胺酯(SE)官能團組成的一個熒光分子。一旦主動擴散進入細胞,其醋酸基團被胞內酯酶切割,生成熒光素酯CFSECFSE具有高度熒光,且能通過其琥珀酰亞胺酯基團共價結合到細胞內的蛋白氨基基團。正是這個共價偶聯反應,CFSE能夠極其長期的保留在細胞內,長達數個月。另外,歸因于這一穩定連接,一旦染料進入細胞,不會轉移到鄰近細胞。無活力細胞仍然是非熒光。而活細胞一旦分化,CFSE能夠很均勻的分散到子細胞中,每分裂一次子代細胞約能得到親本細胞1/2的熒光強度,因此,通過流式細胞儀對熒光強度的檢測,能夠依次分選出未分裂細胞,分裂一次的細胞(1/2熒光強度),分裂兩次的細胞(1/4熒光強度),分裂三次的細胞(1/8熒光強度),以及以此類推其他分裂次數的細胞。CFSE可以檢測分裂多達8次或更多次數的細胞增殖。

CFSE廣泛用于細胞增殖和體內細胞示蹤研究。CFSE的最大激發和發射波長分別為492nm517nm,標記細胞后呈綠色熒光。使用流式細胞儀檢測可用FL1檢測通道。也能用熒光顯微鏡觀察,使用FITC濾片。

 

 

保存條件

-20oC保存,開封前1年有效,其中組分ACFDA SE粉末)需嚴格避光,組分B避免強光照射。

 

產品組成:

編號

組分

保存條件

產品編號/規格

NBS7684

-500T

NBS7684

-1000T

NBS7684-A

CFDA SE粉末

-20oC避光保存

1

1×2

NBS7684-B

CFDA SE溶劑

-20oC避光保存

1ml

1ml×2

NBS7684-C

細胞標記液(10X

-20oC~4℃保存

50ml×2

50ml×4

 

產品使用:

1. CFDA SE儲存液(1000X)制備

a)將低溫保存的CFDA SE粉末置于室溫回溫至少20min,之后短暫低速離心,讓所有粉末都掉落至管底。同時也提前將CFDA SE溶劑置于室溫或25℃水浴片刻直至充分融解。

b)吸取一定量CFDA SE溶劑(比如400μl)到CFDA SE粉末中,充分溶解,短暫低速離心,之后全部轉移到剩下的CFDA SE溶劑中,混勻后,此即為CFDA SE儲存液(1000X)。此配制過程需要避光。

c)按照單次用量分裝,用鋁箔紙包好后,置于≤-20℃避光干燥保存,最好一個月內用完,最長不超過三個月。-70℃保存能適當延長保存周期。

2. CFDA SE標記液(1X)制備

準備適量無菌的細胞培養級去離子水,根據實驗需要用量,配制適量的CFDA SE標記液(1X)。比如,取10ml 細胞標記液(10X),加入90ml 去離子水,充分混勻后,即得到CFDA SE標記液(1X),短期置于4℃保存,長期不用可置于-20℃保存。

3. 染色步驟

a)室溫300×g離心細胞5min,吸掉上清。

bPBS或其他生理緩沖液清洗細胞以去除任何殘留的血清蛋白。之后再同上離心吸掉上清。

c)用1ml CFDA SE標記液(1X)重懸細胞,調整密度為1-5 x 106cells/mL,轉移到15ml離心管內。

d)用CFDA SE標記液(1X)將CFDA SE儲存液(1000X)稀釋到2X。比如,取2μl CFDA SE儲存液(1000X)到1ml CFDA SE標記液(1X),混勻后即為CFDA SE儲存液(2X)。

e)將1ml CFDA SE儲存液(2X)加入到步驟c)中含1ml 待標記細胞的15ml離心管內,輕輕混勻。

f37℃避光孵育15min。【具體的孵育時間可根據實際情況做適當調整,常用孵育時間10-30min。】

g)立即加入10ml完全細胞培養液(含血清)來淬滅染色過程,室溫顛倒幾次混勻。

h)室溫離心去上清,再用5-10ml完全細胞培養液清洗一次。

i 再加入5-10ml完全細胞培養液,37℃孵育5min,以促進CFDA, SE在細胞內的充分反應和未反應的CFDA, SE重新回到完全細胞培養液中。離心去上清,完成最后一次清洗。

j 之后用完全細胞液重懸細胞,此時可用熒光顯微鏡(Ex/Em=492/517nmFITC濾片)或流式細胞儀(FL1通道)來觀察標記效果。或開始用藥物刺激處理或繼續常規培養。經適當時間后用流式細胞儀檢測細胞增殖,或用于特定目的的細胞示蹤。標記細胞也可用于活體動物的移植,并用熒光進行示蹤。標記的細胞呈綠色熒光。

 

注意事項:

1.      CFDA SE溶劑在低溫(如4℃,冰浴)等條件下會凝固而粘在離心管底、管壁或蓋子上,可將其置于25℃溫育片刻直至全部融解后使用。

2.      CFDA SE粉末經溶劑溶劑配制成儲存液后一個月內用完最好,最多不超過三個月。因CFDA SE容易被水解,并在水溶液中變質。使用過程中盡量避免接觸水。而在標記過程中接觸到水是在允許范圍內。

3.      熒光染料均存在淬滅問題,操作和儲存過程中需注意避光,以減緩熒光淬滅。

4.      為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

相關產品:

產品編號

產品名稱

包裝規格

NBS0425-5g

Fluorescein Diacetate二乙酸熒光素

5g

NBS2014-50ug

Calcein, AM, Ultra Pure Grade 鈣黃綠素(綠色)

50ug

NBS7683-5mg

CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

5mg

NBS7684-500T

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

500T

NBS7685-25mg

CDCFDA, SE 活細胞示蹤探針

25mg

NBS7686-100mg

CDCFDA (5(6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein diacetate) 活細胞示蹤探針

100mg

NBS7687-25mg

CFDA (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate)

25mg